故事发生在第二部剧情发生的三年后，昔日挚友哈利·奥斯本变成新一代绿魔，开始追杀彼得来为父报仇，电影同时引入了两个新反派：沙人和毒液：致命守护者。
外星共生体毒液，让彼得变得自私冷酷，影响他的性格与判断，让他在黑暗中迷失，彼得意识到责任与宽恕的重要性，于是摆脱了毒液，他与哈里联手对抗沙人和毒液，哈里为救彼得牺牲，彼得和玛莉·珍也正式和解，托比版蜘蛛侠三部曲也宣告终结。
2007 / 美国 / 动作 科幻 冒险 / 山姆·雷米 / 托比·马奎尔 克尔斯滕·邓斯特
剧情简介：
蜘蛛侠（托比•马奎尔TobeyMaguire饰）在经历了重重考验之后，成为了人人敬仰的正义英雄，抱得美人归。
但是，光环下蜘蛛侠，也有自己的心病：他在第一集时放走了小偷导致最亲爱的叔叔被小偷杀死，帕克一直耿耿于怀。
生活顺意的帕克开始变得目中无人，当他再次抓到那个小偷时，残忍地看着他从楼上摔下致死，过后才发现自己惩罚错了人，真凶是“沙人”。
当帕克将“沙人”残忍杀死后，帕克心内的阴暗面渐渐在帕克的身体内占据了上风，蜘蛛侠最终演变成邪恶的“毒蜘蛛”！糟糕的是，帕克没有察觉到自身的变化，帕克最终如何摆脱自身的邪恶？
